开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
研究背景和立题依据
幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是慢性胃炎和消化性胃溃疡等疾病的重要致病因子，与胃癌发生密切相关。幽门螺旋杆菌感染呈世界性分布，在发达国家，Hp感染率为30%~50%，在我国Hp感染率更加严峻，高达58.07%，且呈现明显的家庭聚集性。目前治疗Hp感染的方法主要基于“三联”药物疗法（成分：质子泵抑制剂、抗生素和铋剂），存在诸多弊端：如Hp耐药菌株增多、药物毒副作用明显、停药反复感染和病人依从性差等。研制Hp疫苗是控制Hp感染性疾病的一种切实有效的方法，逐渐成为国内外学者竞相研究的一个热点。治疗性Hp疫苗具有广阔的应用前景，有望替代“三联”药物疗法，成为治疗Hp相关性胃病的新方法。
幽门螺旋杆菌尿素酶B亚基（UreB）被公认为是研制Hp疫苗的理想抗原。最新实验研究表明：Hp尿素酶A亚基（UreA）也是一个Hp疫苗设计的理想抗原。但是天然Hp尿素酶（Urease）激发的Hp尿素酶特异性抗体不能有效抑制Hp尿素酶活性，难以达到有效的治疗效果。基于以上研究成果，本实验室合理选择Hp尿素酶A、B双亚基的Th和B细胞抗原表位，设计了一种具有高特异性的、有效抑制Hp尿素酶活性的抗体体液免疫应答和特定类型细胞免疫应答的新型治疗型免疫疫苗CTB—UE。但是，其免疫原性相对较差及缺乏有效的免疫佐剂限制其应用。
L. Lactis作为一种公认的安全的微生物，是理想的呈递治疗性蛋白和抗原的载体。L. Lactis的粒径1-10um,刚好是肠道M细胞识别的最佳范围，经口服免疫后，会被肠道派尔淋巴结中的M细胞高效识别并转移穿过上皮细胞，呈递给位于皮下的抗原呈递细胞（APCs，主要是树突细胞）。L. Lactis传递的抗原会被APCs识别然后呈递给特异性免疫细胞引起相应的免疫应答。[10]此外，L. Lactis本身也能引起较弱的免疫应答，外源抗原引起的免疫应答将在整个免疫过程中占优势。机体对外来抗原物质的识别是由特定的受体介导的。
目前，乳酸乳球菌已作为一种有效的佐剂和表达载体运用于各类疫苗的研究中，如人类乳头瘤病毒（HPV）E7抗原[14]、抗鼠疫(耶尔森氏)杆菌（Yersinia Pestis）[12]、疟原虫（Plasmodium falciparum）[15]、A型流感病毒（Influenza A viruses)[16]等。
重组乳酸菌表达异源蛋白是一种研制黏膜给药疫苗的方式，但抗原蛋白表达量低和潜在的生物安全问题（如由胃肠道共生菌引起疾病的可能性和菌株内质粒转移而引起的抗生素耐药性问题）限制了其应用。L. Lactis GEM粒子是一种没有生物性、无基因修饰的细胞壁结构粒子，是将新鲜L. Lactis菌体经过热酸处理，移除其内部DNA和绝大部分细菌蛋白后留下的肽聚糖（PGN）结构。[19]PGN结构可以与含有LysM结构域的锚定蛋白高效稳定地非共价结合，将含有锚定蛋白的抗原融合蛋白携带于GEM粒子表面。[20]经过热酸处理后，L. Lactis 细胞壁PGN结构的暴露：（1）有效提升了GEM粒子携带抗原分子的能力；（2）增强了激活TLR2受体和促进Th1免疫应答的能力。GEM粒子是死菌体且无外源基因修饰，所以不存在生物安全性问题。[12、21]此外，GEM粒子还具有重组乳酸菌所没有的优势，包括：（1）表达于GEM粒子表面的抗原数量是可控且保持不变的，而活体重组菌体表达抗原其表达量受到质粒丢失、代谢负担和启动子活性等多方面影响；（2）抗原以多聚形式高密度暴露于粒子表面增强了对B细胞的活化能力；（3）可以同时在粒子表面展示多种抗原分子；（4）GEM粒子具有高度的稳定性，可以在室温储存，无需冻存。
乳球菌载体疫苗GEM-CTBUE可增强抗原CTB-UE的免疫原性，并提高肠道免疫细胞对抗原的摄取能力，解决了口服重组乳酸菌抗原表达量低和生物安全性等问题。GEM粒子能激活TLR2，理论上能够激发机体针对多种Hp 病原体蛋白的特异性体液免疫应答和有效的Th1型细胞免疫应答，并通过调节黏膜免疫反应，将发挥良好的免疫佐剂功效。
本课题首次构建获得融合蛋白CTBUE-PA，并将其成功展示于GEM粒子表面，为Hp疫苗GEM-CTBUE的免疫学研究打下坚实的基础。
具体实验内容：
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