(一)拟解决的问题:
将肝素前体从E.coliK5的发酵液中分离纯化出来
(二)肝素前体分离纯化方法及步骤:
1.发酵液浓缩至原体积十分之一(旋转蒸发仪)
2.透析(3500Da)除盐除小分子糖
3.脱色:过氧化氢脱色法
1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为9.5,加入过氧化氢(30%)控制终浓度为1.5%,室温条件下放置于电磁搅拌器上匀速搅拌12h。之后加入三倍体积乙醇沉淀,4℃冰箱静置过夜。
4.除蛋白:sevage法除蛋白
在粗多糖溶液中加入氯仿正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。
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