开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一选题依据及课题在理论或实际应用方面的意义：
卵巢癌是发生于卵巢组织的常见恶性肿瘤，是女性生殖器官常见的肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌在三大妇科恶性肿瘤中居第三位，但因卵巢癌致死者却占各类妇科肿瘤的首位。统计发现,在我国卵巢癌每年新发病人数为19.2万,但死亡人数却高达11.4万;在美国每年发病人数为2.2万,死亡1.6万。卵巢癌的高死亡率主要有两个原因，一是早期诊断的困难，另外一个重要的原因是治疗后的高复发率。由于卵巢癌早期多无明显症状,就诊时2/3已属晚期，而卵巢癌不同期别患者预后差异很大，Ⅰ期或Ⅱ期的卵巢癌患者5年生存率可达70～90%，而且无需术后化疗，但是Ⅲ或Ⅳ期的卵巢患者5年生存率仅为5-20%。由此可见，卵巢癌对妇女生命造成严重威胁，因此,积极探索早期卵巢癌的筛查方法,对降低死亡率具有重要意义。
然而，目前由于早期诊断方法有限，卵巢癌早期检出率仅为5%。B超及影像检查不能鉴定卵巢小肿瘤，无法区分良性或恶性肿瘤；穿刺和腹腔镜可能导致穿刺部位肿瘤转移，造成脏器损伤等。目前常用于肿瘤诊断的为特异的肿瘤标志物，就卵巢癌而言，目前广泛使用的肿瘤标志物为CA-125(cancerantigen125),CA-125为卵巢上皮细胞膜表面的一种糖蛋白，但其敏感性很低，虽然CA-125在80%严重的卵巢癌中上调，但在早期卵巢癌中阳性率小于10%，而且CA-125的特异性不高。所以说尽管CA-125可用于中晚期卵巢癌的诊断，以及化疗过程中卵巢癌的复发的诊断，但对卵巢癌的早期诊断并无价值。因此，寻找新的、特异的，灵敏的肿瘤标志物，用于卵巢癌的早期筛查具有重要价值。
叶酸受体alpha;为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原，肿瘤抗原指在肿瘤发生发展过程中过度表达的抗原物质，目前基于肿瘤抗原的诊断方法以及生物学治疗已成为人们发现肿瘤、治疗肿瘤的有效手段。叶酸受体alpha;在卵巢肿瘤中具有特异性的高表达，被认为是一种具有潜力的卵巢癌诊疗靶点。叶酸受体alpha;（folatereceptoralpha;,FRalpha;，也称叶酸结合蛋白FBP,FRA,FLOR-1）为一种分子量约为38-40KD的细胞膜糖蛋白，被认为是一种极具潜力的卵巢癌肿瘤标志物。研究表明在90%以上的卵巢上皮癌及子宫内膜癌中可见FRalpha;的高表达。而且FRalpha;在卵巢肿瘤中的表达水平可高达正常水平的80-90倍。尤其值得注意的是在早期卵巢癌病人中，血清FRalpha;的阳性率可达79%。鉴于叶酸受体alpha;在正常组织中分布极少，而在卵巢肿瘤细胞中有大量表达，而且对卵巢肿瘤具有高度特异性，我们认为叶酸受体alpha;为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原。可以作为卵巢肿瘤的诊断标志物，以及卵巢肿瘤被动免疫治疗的靶点。开发针对此肿瘤抗原的抗体，对卵巢癌的诊断和治疗均有重要意义。
FRalpha;作为卵巢癌的肿瘤相关抗原，具有很强的特异性，是卵巢癌被动免疫治疗的理想靶点。在国外已有几种针对FRalpha;的单克隆抗体的被开发出来，其中包括鼠源抗体，嵌合抗体以及人源化抗体，这些抗体药物还都处于体外实验，动物实验和临床实验阶段。其中以人源性的单克隆抗体MORAb-003的研究最为深入。MORAb-003,也称为Farletuzumab，对FRalpha;具有高亲和性，目前已进入三期临床研究阶段。前期体外研究表明，MORAb-003在生理叶酸浓度下可阻断FRalpha;过表达细胞的生长，但对正常细胞的生长没有影响。另外MORAb-003可激发补体依赖的细胞毒作用（CDC），在补体及MORAb-003的共同作用下，对FRalpha;阳性肿瘤细胞细胞的杀伤率可达98%。MORAb-003还可激发抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC），在效应细胞（人外周血淋巴细胞）的存在下，MORAb-003介导的对FRalpha;阳性肿瘤细胞的杀伤作用可达70%，但对FR阴性肿瘤细胞没有杀伤作用。MORAb-003在动物实验中的抑瘤率可达62%。另外还有人将放射性同位素，毒素，化疗药物与MORAb-003（或针对FRalpha;的嵌合抗体MOV18）相结合，利用单克隆抗体的肿瘤靶向作用将药物运输至治疗部位，不仅可提高药物的局部浓度，还可以减轻全身毒副反应。也有人将MOV18与CD3或CD28抗体连接成为双功能抗体，此类抗体一方面与肿瘤细胞结合，一方面与T淋巴细胞上的TCR/CD3复合物结合，可将T淋巴细胞招募到肿瘤位点，提高抗肿瘤作用并可降低副反应。
国内对叶酸和叶酸受体的研究多为以叶酸为药物载体，将放射性物质或抗肿瘤药物和叶酸进行偶联，从而将药物导向肿瘤细胞，进行肿瘤的影像学诊断以及治疗，目前尚无针对该靶点的疫苗研究报道。随着分子免疫学和肿瘤疫苗学的快速发展,基于肿瘤抗原特异性的主动免疫治疗在机体杀伤肿瘤过程的重要作用得到深刻认识,利用CTLs(cytotoxicTlymphocytes)的特异性杀伤作用对肿瘤进行治疗,已经成为颇具前景的肿瘤疗法。
二课题实施的具体方案及预期实验结果
1FRalpha;真核重组表达质粒
a、利用RPMI1640（含10%小牛血清）培养基培养SKOV-3卵巢癌细胞
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