开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题背景:处于极地条件的放线菌,如南极具有低温、少营养、高盐和强辐射的地理环境特征,产生了独特的代谢方式和机体防御体系,具备产生结构新颖的活性次级代谢产物的巨大潜能。故在南极放线菌自我合成的具有抗菌效果以及对酶具有抑制效果的先导化合物的发酵液中存在的组分进行提取纯化及含量测定具有重要意义。
alpha;-葡萄糖苷酶是引起许多代谢混乱疾病的原因,而N1发酵液中具有多种分组对其拥有抑制作用。适合抑制剂的合成开发途径一般有3种:天然提取;人工合成;微生物代谢产物。其中天然提取难度大且产量较低,人工合成步骤繁琐,而微生物代谢产物活性高潜力大,成为寻找适应产物的最佳途径。
目前已有的HPLC方法可以对alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂的含量进行定性定量测定,但是混合发酵液中组分多且复杂,对色谱柱有较大损伤,并且影响准确性及精密性;而采取薄层扫描色谱来进行含量测定,具有分离混合产物,微量适用并且可以在发酵过程中进行多时期跟踪测量,对各个时期进行含量纯度鉴定。仍不失为一种较好的方法。文献中未见报道。
拟研究和解决的问题:机体内的alpha;-葡萄糖苷酶分解食物中的多糖为单糖后经小肠吸收,其含量和活性的失衡可引发代谢紊乱疾病,如糖尿病等。长期以来,人们试图寻找化合物抑制或调节alpha;-糖苷酶活性。目前,其抑制剂的来源主要有从天然植物中提取、人工合成和微生物发酵产生,后者为主要的来源(如阿卡波糖等)。
由于HPLC等检测方法对alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂的含量测定并非最优,故选择薄层扫描色谱来进行样品含量测定,微量适用并且可以在发酵过程中进行多时期跟踪测量,对各个时期进行含量纯度鉴定。
研究目的和意义:
本毕业设计将致力于研究出一种合适的薄层展开系统并利用光密度扫描仪对alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂N1分离纯化过程各步骤中(发酵液、中间体)其含量进行时实监测,并与HPLC法进行比较,验证其方法的有效性。从而达到控制其产品质量的效果。
研究内容:在实验室水平探索薄层扫描色谱对南极放线菌代谢产物alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂N-1的含量测定方法设计,筛选出最佳展开剂,并在不同尺寸的薄层板上进行试验,最终摸索出最佳方案。
具体技术路线如下:查找文献,进行实验设计和方法研究→制小板,摸索实验用固定相,流动相等实验条件→进行中板试验→再进行大板试验→优化溶剂,进行标准曲线的制定→优化标准曲线(重现性,稳定性,加样回收率以及精确度实验)→进行alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂N-1的含量测定。
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