开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一.拟研究或解决的问题
研究酒精依赖中胞外钙离子的位点及P2X4、钙、乙醇三者相互作用的机制;在体验证P2X4参与酒精依赖的分子基础;进行干扰乙醇和P2X4受体相互作用的创新药物先导分子发现。
二.采用的研究手段
1.a)通过转染的方法在HEK293细胞上外源表达P2X4受体，改变电生理记录时胞外溶液中的钙离子浓度，比较在不同钙离子浓度时，酒精对于P2X4受体的抑制作用。
b)通过改变胞外溶液中的钙离子浓度，使用电生理方法观察其对于ATP引起的P2X4受体电流的影响。
c)使用以上同样的方法，观察钙离子对于P2X家族其他亚型是否有作用，确认钙离子对于 P2X4受体的作用是否特异。
d)通过点突变的方法，对胞外带电氨基酸残基进行丙氨酸扫描突变，观察钙离子对于突变之后的P2X4受体的作用，得到与钙离子相互作用的氨基酸以及大概作用区域。
e)在确认了直接相互作用氨基酸的基础上，运用metadynamics寻找钙离子在P2X4受体上的具体作用模式;运用长时程分子动力学观察钙离子结合导致的P2X4受体构象改变;并结合点突变、 二硫键连接、western blot、单通道分析等方法进行功能验证。
2.通过比较野生型、基因敲除型和突变型三种小鼠之间的饮酒行为方式，在体验证P2X4受体参与酒精使用障碍结构基础。
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