开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
研究背景和立题依据
乳腺癌是恶性肿瘤，对人类的健康有着巨大的威胁,积极寻找治疗乳腺癌新的治疗途径，对人类的健康事业的发展有着重要的意义。真核生物的mRNA 3rsquo;UTR(Untranslated Regions)在肿瘤的发生发展中扮演者重要的作用。目前已有研究发现，一些已知的致癌基因和抑癌基因的功能调控与3rsquo;UTR有关[1]；3rsquo;UTR的结构变化会导致一些抑癌基因的失活[2]；一些基因的3rsquo;UTR在转染进入肿瘤细胞后表现出抗癌基因的活性[3]；一些基因的3rsquo;UTR可以通过与其他基因竞争microRNA反应原件（MRE）来调节其他基因的表达[4]。在乳腺癌细胞系MCF-7中研究cdc42-3rsquo;UTR的功能和相关microRNA的靶向关系。细胞分裂周期蛋白42 ( cell divis ion cycle42, Cdc42) 是Rho GTP 超家族酶中的一个亚类。近年来研究发现, Cdc42 在多种恶性肿瘤中高表达, 并与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关[5-7]。cdc42上调可以使vimentin上调和E-cadherin下调[8-9]，最终导致细胞侵袭和转移能力上调。
microRNAs是一种单链、非编码RNAs。近年来，研究者发现microRNAs具有重要的生物学作用，包括对乳腺癌侵袭转移的调控作用。此次实验室是研究miR-1对乳腺癌细胞MFC-7中cdc42的影响以及对乳腺癌细胞MFC-7侵袭和转移能力的影响。
本课题通过构建cdc42 3rsquo;UTR表达载体，转染cdc42-3rsquo;UTR重组质粒和靶向cdc42的siRNA分别上调下调该基因，转染miR-1 mimics和miR-1inhibitor上调下调miR-1对cdc42和vimenti、E-cadherin的影响，通过实时荧光定量PCR以及western blot研究其对相关基因以及蛋白水平表达的影响，同时通过侵袭和迁移实验研究其对于细胞侵袭和迁移能力的影响。
具体实验内容：
- 构建表达质粒
对cdc42 3rsquo;UTR设计适宜的引物，选取合适的PCR条件，进行扩增，获取cdc42的3rsquo;UTR基因序列，并将其插入pcDNA3.1( )载体然后转化入大肠杆菌DH5alpha;感受态细胞中进行扩增，挑取单克隆，通过测序确认质粒构建成功。
2、脂质体转染
利用脂质体Lipo-2000将表达质粒和miR-1转染进入乳腺癌系细胞MCF-7。
3、实时荧光定量PCR
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