海洋放线菌XE-1中蛋白酶的分离文献综述

 2022-12-09 21:15:45

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

1.研究意义

蛋白酶是最重要的工业酶之一,约占世界范围酶总量的60%。其在工业化生产中的应用正在快速增加,如发酵、食品生产、药物生产及蛋白质加工、多肽合成和作为洗涤剂的成份。蛋白酶来源广、数量多、用途广,可以由动物、植物、真菌和细菌产生。

植物蛋白酶的应用已久,如木瓜蛋白酶等,常用动物蛋白酶有凝乳酶、胰蛋白酶等。但现代使用最广泛的是微生物蛋白酶,因为微生物的种类多,生长条件容易控制,繁殖速度快,可通过人工控制发酵条件在短时间内获得大量产物,而且几乎所有种类的微生物都可以产生蛋白酶,同种微生物甚至可以产生不同种类型的蛋白酶。

微生物蛋白酶可分为真菌蛋白酶、细菌蛋白酶和放线菌蛋白酶。细菌蛋白酶主要为芽孢杆菌属产生的酸性和碱性蛋白酶。真菌产生的蛋白酶多于细菌,可产生酸性、碱性和中性蛋白酶,但其反应速率和耐热性都低于细菌蛋白酶。放线菌广泛存在于土壤中,且能产生大量活性物质,是大多数抗生素的产生菌,同时放线菌也可以产生酶活力较强的蛋白酶。对耐热蛋白酶的研究曾是微生物蛋白酶研究的一个主要方面,近年来,随着对海洋微生物蛋白酶的开发对蛋白酶的研究重点逐渐转向嗜冷酶、抗有机溶剂和耐碱酶。

海洋生物生存于低温、高压、寡营养的特殊环境中,其生物多态性远超陆地生物。海洋生物之间的生态作用更加复杂和广泛,其产生的生物活性物质的活性远高于陆地生物。海洋动植物中80%以上活性成分源于海洋微生物。海洋放线菌具有很强的再生、防御、识别能力,会产生大量结构新颖的次级代谢产物以适应其生存环境。据统计,近年来50%以上的新发现的海洋微生物活性物质由海洋防线菌产生,其具有巨大的开发应用潜力。

水溶剂是传统的生物催化溶剂,但在工业生产中,有机溶剂拥有更大的优势,其对于疏水底物的高溶解度有利于反应进行。大多数天然蛋白酶在有机溶剂中活性差稳定性低,为使其保持活性需要进行修饰、固定化等处理,成本高、操作复杂且效果并不理想。本课题将从海洋放线菌发酵产物中分离天然的对有机溶剂耐受的蛋白酶。

2.研究方法

(一)蛋白酶的提取和纯化

1.乙醇沉淀

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