开题报告内容:
1. 拟研究解或解决的问题
针对野生型硫酸软骨素裂解酶底物谱窄和肝素酶缺少外切酶特性的现状,本实验将尝试通过定向进化策略获得一种多功能的新型人工肝素酶,使其兼具野生型硫酸软骨素裂解酶II的外切特性和肝素酶底物谱广的特性,进而为多糖测序工作提供有效工具。
2. 采用的研究手段
本实验利用遗传双交换技术,对3个不同的肝素酶进行同源双交换,依次敲除这3个酶的基因,人为破坏其肝素代谢系统,基因公司合成chondroitin sulfate II 基因,利用随机突变方式(使用易错PCR)构建突变体库,并将突变体其与载体连接,导入肝素黄杆菌中表达,最终使表达的Chondroitinase II成为一种底物广谱、能够水解肝素的外切酶,并进行功能验证。
3.文献综述
酶的分子改造技术
近年来新酶和酶的新用途的开发速度远不能满足当今工业化生产的需求,因此设计和改造以获得催化性质更优的新酶已成为酶学领域的重要发展方向。目前定向进化和理性设计是酶分子改造最常用方法。
1)定向进化
定向进化(directed evolution)又称分子进化,就是在实验室模拟自然进化过程以获得满足要求的酶突变体[1]。该方法不需了解酶的空间结构和催化机理,所以已广泛用于酶的催化活性和立体选择性改造。例如Bornscheuer等[2]联合运用易错PCR和饱和突变技术对P. fluorescens的酯酶进行了定向改造,希望能够获得选择性地制备药物中间体(S)-3-丁炔-2-醇的突变体,结果经过两轮的突变和筛选最终获得了E值从3提高到96的目标突变体Ile76Val/Val175Ala。 虽然近些年来定向进化技术已取得了较大的进展,并广泛应用于酶的定向改造,但由于突变体库庞大和高通量筛选方法的缺乏,该方法有待进一步改进。
以上是毕业论文文献综述,课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。